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pet28因为N端带有HIs标签，对于蛋白的表达和纯化都很有帮助， 所以pet28、rosetta的组合是非常好的。 建议你: 首先确定插入的序列是正确的，没有突变，通过测序便可知。 确定使用的IPTG没有失效，可以使用正对照。 然后在摸索在不同OD、不同时间的表达
查看完整版本请点击这里： 【求助】目的片断与PET-28A的体外连接！. 各位老师： 我在用目的片断和表达质粒PET-28a作体外连接 体系如下：目的片断 5.5ul 质粒 1ul buffer 2.5ul T4 DNA 酶 1ul dH2O 15ul 总共为25ul,转化感受态用了15ul. 连接是从上午8：30到晚上19：30一共连了11 ...
丁香园是面向医生、医疗机构、医药从业者以及生命科学领域人士的专业性社会化网络，提供医学、医疗、药学、生命科学等相关领域的交流平台、专业知识、最新科研进展以及技术服务。.
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如果用普通的DH5a可能是检测不到表达条代。. 另外IPTG诱导我们通常是做4、5、6小时的比较，我认为IPTG诱导至少要4个小时才能检测到蛋白表达，通常5个小时左右有高效表达。. 查看全部回复 我也来说两句. 查看完整回复请点击这里： 【求助】用pet28a表达不出蛋白 ...
pET28载体并非专门用作周质表达，需要解释的是，这个载体在pET系统中适宜于表达可溶性相对强的蛋白，从我使用的经验来看，pET28载体的表达量不是很高，合成速度相对较慢，反而有利于可溶性蛋白释放到周质中，如果蛋白带有信号肽或DsbA.Trx等周质
查看全部回复 我也来说两句. 查看完整回复请点击这里： 【求助】质粒pET28a奇怪现象. 从JM109中提取质粒pET28a，跑0.8%的琼脂糖凝胶电泳显示位置在10000bp以后，且为单一条带。. 而实际大小为5369bp，试过单酶切及双酶切后，位置才显示正确，请教大家为什么会这样 ...
用pet-28a载体的原核表达出来的蛋白在破菌前肯定会出现在菌体沉淀中，不会分泌在培养基上清中的。. 至于破菌以后，表达出来的在沉淀中还是在上清中，要由目标蛋白的性质来定了，没有固定形式的。. 至于是否是包涵体，主要也是由目的蛋白的性质与表达量 ...
2段蛋白分别构建到同一个载体上，共转染293是可以实现共表达的，因为：在瞬转的情况下，基因不需要复制即可表达；在稳转的情况下，基因可以同时整合到基因组中，同样可以共表达。. 而在大肠杆菌中，大肠杆菌分裂很快，质粒如果不能在大肠杆菌中复制 ...
如果测序没问题的话，建议Western检测一下his信号。. 有的表达太弱的话，诱前诱后看不到明显条带是正常的。. 一、从ncbi下载三个基因的cds（从ATG开头到终止密码子）。. 然后选用新买的pET28a作为载体，设计引物（三个基因都是设计同样的前后酶切位点，分别EcoRI ...
