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2021年2月8日 · 2021.02.08. 蛋白質表達系統 Protein Expression System. 蛋白質表達 (protein expression) 是獲得蛋白質的生物技術，利用人工合成的DNA或RNA從不同的宿主表達系統中取得目標蛋白質。 原核系統-大腸桿菌蛋白質表達. 原核生物中的大腸桿菌是目前最普遍的表達系統，具有遺傳背景清楚、生長繁殖快、易於快速大量生產目標蛋白，所需的成本也相對較低。 將欲表現外源基因的質體轉型 (transform)至菌體，經培養放大細菌總量，以及誘導蛋白質表現後，可收集菌體經破菌與純化流程，即可得到大量高純度的蛋白。 得到目標重組蛋白需要多層面的配合，包括挑選適合的菌種、質體、誘導、以及蛋白質純化方式。
原核表達載體是能攜帶插入外源基因序列進入原核細胞中進行表達的載體。 目前應用最為廣泛的原核表達載體是大腸桿菌表達載體，一般說的原核表達系統主要是指大腸桿菌表達。 大腸桿菌表達載體主要有 pET系列、pGEX系列和 pQE系列。 應用最多的是 pET系列，因為其能在大腸桿菌中高效且高產的表達蛋白。 一、大腸桿菌蛋白表達原理. 表達載體. 小型環狀 DNA或稱質體 DNA (plasmid DNA) 可以於大腸桿菌表達系統中自我複製。 完整的載體必須具有複製起點 (origin of replication)、篩選標記 (antibiotic resistance)、 啟動子 (promoter)、插入的目的基因 (coding sequence) 和終止子 (terminator) 。
由於原核細菌培養條件簡單，外源基因導入方便，成為現在重要的重組蛋白表達系統。 在基因轉化入菌株以後，誘導其在宿主菌內表達目的蛋白質，收集再純化，是常規的蛋白表達方法。 然而原核表達的蛋白質，能夠表現出生物學活性的通常都是存在於上清液的可溶性蛋白，不溶的包涵體沒有生物活性。 因此，目的蛋白的可溶性表達，就成為了大多數蛋白表達實驗的追求，如何減少或者避免包涵體的出現也是困擾大多數人的問題所在。 那麼，增加可溶性蛋白表達的方法有哪些呢？ 降低蛋白質合成的速率. 蛋白質的合成並非越快越好，很多時候，蛋白質在原核細菌內往往由於合成太快，導致沒有充分時間摺疊，就會形成包涵體，針對這一點，可以從以下方面入手。 1. 降低培養溫度； 2. 使用弱一些的啟動子； 3.降低誘導劑的濃度；
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2022年12月1日 · 質粒載體中除複製起始位點、篩選標記、多克隆位點外，還具有其他一些表達或調控元件，如轉錄調控元件、翻譯調控元件和融合表達標籤蛋白等。 P/E：啟動子/增強子；Terms：終止信號；加poly (A)信號：可以起到穩定mRNA的作用等等。 解讀質粒圖譜. 知道了這些基礎知識，再回過頭看看如何閱讀質粒圖譜： 1看箭頭方向.
2023年2月10日 · 廣義的原核表達，是指發生在原核生物內的基因表達。 狹義的原核表達，常出現於生物工程中。 是指通過基因克隆技術，將外源目的基因，通過構建表達載體並導入表達菌株的方法，使其在特定原核生物或細胞內表達。
體外重組蛋白表達技術已經是相當常見的技術。 目前，體外重組蛋白表達系統主要有四類： 原核表達系統 、 哺乳動物細胞表達 、 酵母表達系統 及 昆蟲細胞表達 。 表達的一般實驗包括載體構建-表達鑑定-蛋白純化三大步驟。 在構建載體階段，除了一些必要的表達元件，還需要考慮的密碼子優化和標籤 (Tag)的選擇。 選擇合適的標籤 (Tag)不但有利於蛋白的純化，促進蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結構功能和下游應用。 本文詳細介紹了幾種蛋白純化標籤以及抗體，幫助我們更好的設計實驗。 蛋白純化標籤比較. 各個標籤性能對比表. HIS-Tag蛋白純化的首選標籤.
有些分類學者將原核生物歸於原核生物域（Prokaryota），但現行的 三域系統 不採此說，而是將 古菌域 和 細菌域 的生物視為原核生物，原核生物本身不作為生物分類的層級。 原核生物為比同為 單細胞生物 的 原生生物 更細小和簡單。 根據《伯傑氏細菌鑑定手冊》，原核生物分為四大類，「有細胞壁的革蘭氏陰性真細菌」，「有細胞壁的革蘭氏陽性真細菌」，「無細胞壁的真細菌」，「古細菌」。 環境中常見的原核生物有 細菌 、 放線菌 、 古細菌 、 螺旋體 、 衣原體 、 支原體 、 立克次氏體 和 藍細菌 等光合性細菌。 原核生物細菌. 系統發生樹（演化樹）生動地表明與真核生物相比，原核生物的種類更為豐富.
